组织透明化应用丨《Nature》后眼淋巴系统可以介导眼脑免疫
文章摘要
2024年2月，耶鲁大学的研究人员在Nature上发表的研究结果表明，眼睛的前后隔室具有明显的淋巴引流系统，后者通过视神经鞘中的淋巴管引流到颈深淋巴结。
研究结果揭示了，共享的淋巴回路能够在后眼和大脑之间建立统一的免疫反应，是未被研究的眼睛免疫特征，并为眼部和中枢神经系统（CNS）疾病的治疗开辟了新路径。
文献截图
研究人员使用转录组学方法以及结合免疫标记的组织透明化方法(iDISCO) 实现的三维成像，获得不同脊椎动物视神经的淋巴管网的全局视图（见结果3）。
研究结果
后眼中的抗原引起大脑中的免疫反应
通过四种给药途径给小鼠接种热灭活HSV-2疫苗。
intraperitoneal (i.p.)：腹腔
intracranial (i.c.)：颅内
intracameral (anterior chamber (AC))：前房
intravitreal (posterior chamber (IVT))：后房
后眼中的抗原引起大脑中的免疫反应
这些数据表明，眼-脑的免疫联系与许多CNS疾病关系密切。
眼内前房和玻璃体之间存在分隔引流系统
为了研究眼前室和后室的不同引流系统，研究团队通过AC或IVT途径注射荧光标记的右旋糖酐，并定量测定右旋糖酐的滞留动力学。
superficial CLNs (sCLNs) 颈潜淋巴结
deep cervical LNs(dCLNs) 颈深淋巴结
眼睛有隔离的淋巴引流系统
结果证明了眼内AC和玻璃体间有分隔的淋巴引流系统，从玻璃体到dCLNs有一条特定的路线。
视神经鞘拥有功能性淋巴管
研究团队使用通过空间转录组学、组织透明化技术（iDISCO）、共聚焦成像，染料追踪等方法发现在视神经鞘具有淋巴管，并绘制了视神经鞘中淋巴管网络图。
斑马鱼视神经切片的免疫染色，Mrc1a标记淋巴管(白色箭头）
iDISCO免疫标记兔
iDISCO免疫标记猪
iDISCO免疫标记非人灵长类动物
LYVE1和VEGFR3共定位视神经和交叉的淋巴管(白色箭头)
对野生型小鼠视神经鞘进行LYVE1、CD31、PROX1和VEGFR3染色
小鼠眼球和视神经的10x VISIUM空间测序
总之，研究团队发现眼睛后室具有独特的淋巴引流系统，并与CNS共享。
组织透明化应用丨《Nature Cell Biology》股骨透明化技术揭示骨髓再生机制
文章摘要
2023年11月27日，北京生命科学研究所/清华大学生物医学交叉研究院沈博团队与美国西南医学中心/霍华德休斯研究所Sean Morrison在Nature Cell Biology杂志上在线发表题为Leptin receptor+ cells promote bone marrow innervation and regeneration by synthesizing nerve growth factor的研究论文。
文献截图
瘦素受体表达LepR+细胞通过合成神经生长因子NGF维持神经，神经促进LepR+细胞产生生长因子，从而促进骨髓再生。
研究结果
LepR+细胞和平滑肌细胞是骨髓中NGF的主要来源。透明化股骨共聚焦成像显示，NGF主要由骨髓内微动脉和血窦周围的基质细胞表达。
NGF主要通过LepR+基质细胞在骨髓中表达
LepR+细胞的NGF是维持骨髓神经所必需的
研究人员认为平滑肌细胞、成骨细胞等缺失对骨髓NGF水平、神经纤维数量没有显著影响。LepR+细胞中缺失Ngf使骨髓中的Ngf严重减少。
6-8月龄 Leprcre/+; Ngffl/∆小鼠与对照组 Ngffl/∆骨髓透明化成像显示，LepR+细胞的NGF是维持骨髓神经所必需的。
来自LepR+细胞的NGF对于维持骨髓中的神经纤维是必需的
骨髓神经分布促进造血功能再生
研究人员发现在照射后14-28天，与对照组相比，Leprcre/+; Ngffl/∆小鼠的血液和骨髓细胞计数以及造血干细胞和祖细胞的数量广泛减少。
股骨骨髓透明化后内黏蛋白标记血管显示，照射后28天，与对照组相比Leprcre/+; Ngffl/∆小鼠出现造血和血管再生缺陷。
照射后Leprcre/+; Ngffl/∆小鼠出现造血和血管再生缺陷
NGF在局部发挥促进骨髓神经维持的作用
研究人员发现NGF在骨髓内局部起作用，促进造血细胞、基质细胞和血管细胞再生。骨髓透明化成像结果显示， 两个月Prx1-cre;Ngffl/fl小鼠股骨骨髓神经纤维缺失，椎髓神经支配正常。
Prx1-cre;Ngffl/f小鼠在长骨中表现出神经纤维的缺失以及造血和血管再生的缺陷，但在椎骨中没有
神经发芽使再生因子的表达增加
与未受照射的小鼠相比，研究人员观察到6月龄对照小鼠的NGF水平在照射后14天显著增加，但在6月龄Leprcre/+; Ngffl/∆小鼠中没有。
另一方面，在神经纤维10µm以内的LepR+细胞和Scf-GFP+基质细胞的百分率，受照小鼠明显高于未受照小鼠。因此，邻近神经纤维的骨髓再生可能有所增强。
图b为30um厚切片成像结果，NGF主要在脂肪细胞中表达。图f显示了0天和14天的骨髓中神经纤维数量。
在照射后来自LepR+细胞和脂肪细胞的NGF促进神经发芽，增加再生因子的表达
神经激活LepR+细胞中的β肾上腺素能受体
β2和β3肾上腺素能受体均能促进造血再生，而β1肾上腺素能受体并不是必需的。
照射后神经出芽通过激活LepR+细胞及其子代细胞的β肾上腺素能受体，增加再生因子的表达
研究结果
研究团队已经证明，眼后腔室有一个独特的淋巴引流系统，在解剖上与中枢神经系统脑膜淋巴网络在dCLNs处结合。
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关于海卓生物
海卓生物基于国际领先的有机试剂组织透明化技术，开发出新一代国产化组织透明工具，广泛适用于各种模式动物及人的组织器官透明化，操作简单，染料和抗体渗透能力强。为科研和临床提供全套透明化解决方案。
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